一、免疫磁珠法分離細(xì)胞原理
免疫磁珠法分離細(xì)胞是基于細(xì)胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結(jié)合,在外加磁場中,通過抗體與磁珠相連的細(xì)胞被吸附而滯留在磁場中,無該種表面抗原的細(xì)胞由于不能與連接著磁珠的特異性單抗結(jié)合而沒有磁性,不在磁場中停留,從而使細(xì)胞得以分離。
二、MACS微珠(MicroBeads)
MACS微珠是一種與高度特異性單克隆抗體相偶聯(lián)的超順磁化微粒,用于目的細(xì)胞分離或者去除細(xì)胞的磁性標(biāo)記。微珠直徑約有50nm,比細(xì)胞小200多倍,體積為細(xì)胞的百萬分之一,光學(xué)顯微鏡下不可見。微珠由多聚糖和氧化鐵組成,無毒性,對細(xì)胞無損傷,可以生物降解。MACS微珠與流式細(xì)胞儀兼容,不會影響細(xì)胞的光散射特性;磁性標(biāo)記只占用20-30%的結(jié)合位點(diǎn),不影響細(xì)胞的熒光抗體標(biāo)記。此外,MACS微珠可以大限度地避免細(xì)胞活化;無需解離磁珠,可以直接進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn):如流式細(xì)胞儀分析或分選、細(xì)胞培養(yǎng)、分子生物學(xué)研究、回輸給人或者動(dòng)物。
MACS微珠主要有三種:直標(biāo)微珠、間標(biāo)微珠、多選微珠。其中間標(biāo)微珠有抗免疫球蛋白微珠、抗生物素微珠或鏈霉親和素微珠、抗熒光素微珠。多選微珠是專門為分選細(xì)胞亞群而研制的一種微珠。這種微珠通過特殊的方式與抗體偶聯(lián),在一次陽性分選完成后,與細(xì)胞結(jié)合的多選微珠可以被解離試劑剪切下來,陽性分選的細(xì)胞可以進(jìn)行再次陽性分選或者去除分選。
三、MACS分選柱(Separation Column)
MACS分選柱是一類填充有不同規(guī)格鐵珠的塑料容器,鐵珠表面有親水包被,因此不會損傷細(xì)胞。在磁場外MACS分選柱不帶有磁性,但是當(dāng)置于一個(gè)磁場—MACS分選器中時(shí),分選柱內(nèi)的鐵珠可以使分選器的磁場增強(qiáng)1000倍,足以滯留僅標(biāo)記有極少量微珠的目的細(xì)胞;磁性標(biāo)記細(xì)胞從分選柱中通過時(shí)可以受到均勻的磁力作用,從而提高分選純度和回收率。手動(dòng)操作在30分鐘內(nèi)可完成,自動(dòng)分選僅需2.5-10分鐘,得到的細(xì)胞可立即用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。此外,大多數(shù)MACS分選柱都是無菌包裝,一次性使用,可以滿足細(xì)胞培養(yǎng)所需的無菌條件。
四、MACS分選器(MACS Separators)
MACS分選器由磁鐵和支架構(gòu)成。與分選柱一起組成高強(qiáng)度的梯度磁場。根據(jù)應(yīng)用范圍分為研究用和臨床應(yīng)用的MACS分選器,根據(jù)操作方式分為手動(dòng)和自動(dòng)分選器。
1、MiniMACS分選器和OctoMACS分選器
MiniMACS分選器是專為手動(dòng)分選動(dòng)、植物細(xì)胞,細(xì)菌、病毒、細(xì)胞器和mRNA等分子而設(shè)計(jì)的。該設(shè)備價(jià)格低廉,快速分選,應(yīng)用廣泛,易于操作,是獲得少量高純度細(xì)胞的理想設(shè)備。OctoMACS分選器把8個(gè)MiniMACS分選器連在一起,可以在一臺儀器上同時(shí)進(jìn)行8個(gè)標(biāo)本的分選。
2、MidiMACS分選器和QuadroMACS分選器
MidiMACS分選器是MiniMACS分選器的擴(kuò)大版本,與LS和LD分選柱配合使用,可陽性選擇或者去除大量高純度細(xì)胞。QuadroMACS分選器把4個(gè)MidiMACS分選器連在一起,可以同時(shí)進(jìn)行多個(gè)分選過程,或者同時(shí)進(jìn)行多個(gè)樣本分選,也可將一個(gè)大的樣本分成數(shù)個(gè)部分同時(shí)分選。
3、VarioMACS分選器
VarioMACS分選器有多種適配器,可以使用MS、LS、LD和CS分選柱。可用于陽性選擇和去除分選:既可高純度地分選出稀有細(xì)胞,也可用來從細(xì)胞懸液中去除多達(dá)2×108非目的細(xì)胞。
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