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SILAC-細(xì)胞差異蛋白質(zhì)組分析服務(wù)

SILAC-細(xì)胞差異蛋白質(zhì)組分析服務(wù)

型號(hào):   更新時(shí)間:2024-11-09

簡(jiǎn)要描述:

SILAC-細(xì)胞差異蛋白質(zhì)組分析服務(wù) 在細(xì)胞的增殖過(guò)程中,穩(wěn)定同位素標(biāo)記的K和R自然“摻入"到蛋白質(zhì)中,從而在細(xì)胞中所有的蛋白質(zhì)上引入了質(zhì)量標(biāo)簽(Mass Tag,3-10Da)。

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應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)

SILAC-細(xì)胞差異蛋白質(zhì)組分析服務(wù)簡(jiǎn)介

SILAC(Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)是基于哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)對(duì)“必需氨基酸”的依賴原理,將穩(wěn)定同位素(13C、15N)標(biāo)記的Lys(K)和Arg(R)加入細(xì)胞培養(yǎng)基中對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。在細(xì)胞的增殖過(guò)程中,穩(wěn)定同位素標(biāo)記的K和R自然“摻入”到蛋白質(zhì)中,從而在細(xì)胞中所有的蛋白質(zhì)上引入了質(zhì)量標(biāo)簽(Mass Tag,3-10Da)。借助后續(xù)MS的高分辨率,在MS層面上,實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)水平進(jìn)行高精度定量的技術(shù)。

SILAC技術(shù)基本的應(yīng)用是做細(xì)胞/細(xì)胞亞組分(細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、線粒體、外泌體等)的各種蛋白質(zhì)表達(dá)差異譜分析。此外,(1)使用SILAC技術(shù)標(biāo)記小鼠、酵母、大腸桿菌、果蠅、線蟲等模式生物,從而可以借助MS直接定量比較動(dòng)物個(gè)體的蛋白質(zhì)組差異(SILAM);(2)利用SILAC技術(shù),借助細(xì)胞株,通用可以分析人體的不同組織的蛋白質(zhì)表達(dá)譜差異(super-SILAC);(3)SILAC結(jié)合IP-MS(免疫沉淀-質(zhì)譜)可定量分析蛋白質(zhì)互作/翻譯后修飾的定量分析(SILAC+IP-MS)。

SILAC技術(shù)的優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在(1)直接通過(guò)細(xì)胞代謝,實(shí)現(xiàn)對(duì)整個(gè)細(xì)胞蛋白質(zhì)組的標(biāo)記,從實(shí)驗(yàn)的源頭引入質(zhì)量標(biāo)簽(Mass tag),實(shí)驗(yàn)的系統(tǒng)誤差顯著降低;(2)實(shí)驗(yàn)步驟簡(jiǎn)單,只要將SILAC標(biāo)記的和非標(biāo)記的蛋白質(zhì)1:1混合,就能進(jìn)行后續(xù)MS分析;(3)定量準(zhǔn)確度更高,定量信息豐富。

二、SILAC-細(xì)胞差異蛋白質(zhì)組分析服務(wù)服務(wù)方案

(一)整體服務(wù):

只需客戶提供細(xì)胞即可,我方負(fù)責(zé)完成:

SILAC培養(yǎng)基制備。

細(xì)胞SILAC標(biāo)記及標(biāo)記效率MS檢測(cè);

SILAC標(biāo)記細(xì)胞與非標(biāo)記細(xì)胞擴(kuò)增;

蛋白質(zhì)提取、分離(SDS-PAGE)及染色;

切割條帶,分別進(jìn)行LC-MS測(cè)試;

MS數(shù)據(jù)分析,完成蛋白質(zhì)的鑒定及定量分析,篩選差異表達(dá)蛋白;

差異表達(dá)蛋白常規(guī)生物信息學(xué)分析;

我方同樣有技術(shù)實(shí)力進(jìn)行具體蛋白質(zhì)(經(jīng)用SILAC實(shí)驗(yàn)篩選、驗(yàn)證后的蛋白)的功能實(shí)驗(yàn)。如有需求,方案另議。

(二)合作共贏方案:

原則是通過(guò)協(xié)商簽訂合同,雙方各完成一部分實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。

客戶方需從我方購(gòu)買相應(yīng)的SILAC培養(yǎng)基及耗材。我方提供細(xì)胞SILAC標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)方案,協(xié)助客戶完成細(xì)胞的SILAC標(biāo)記過(guò)程。

標(biāo)記完成后,需用LC-MS鑒定細(xì)胞標(biāo)記效率。該步驟需交由我方完成鑒定。

正式實(shí)驗(yàn)的蛋白質(zhì)樣品,需交由我方完成MS鑒定和定量分析。

三、其他特色:

SILAC培養(yǎng)基。我方能生產(chǎn)多種類型的SILAC培養(yǎng)基(K6R6、K4R6、K6R8、K8R10等),7-10個(gè)工作日發(fā)貨,免去客戶從國(guó)外進(jìn)口SILAC培養(yǎng)基及其標(biāo)記氨基酸的漫長(zhǎng)貨期。

SILAC培養(yǎng)基,500ml起訂。

我方同時(shí)銷售SILAC相關(guān)的試劑/耗材(dialyzed FBS,filter等),歡迎咨詢。

四、客戶發(fā)表的代表性論文:

Analytical chemistry 2017, 89(19):10248-10255. 

Analytical chemistry 2017, 89(21):11468-11475.

Journal of proteome research 2013, 12(5):2055-2066.

Amino acids 2014, 46(4):841-852.


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